實時熒光定量PCR儀,由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成,用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設(shè)備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實時設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進行正?;幚韥韽浹a背景熒光的差異。正?;罂梢栽O(shè)定域值水平,這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。
醫(yī)療應(yīng)用
⑴ 病原體檢測
目前,采用定量PCR檢測技術(shù)可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結(jié)核分枝桿菌、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定。與傳統(tǒng)的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優(yōu)點。
如:結(jié)核菌基因診斷的意義主要表現(xiàn)在:
a.區(qū)分TB與其它分枝桿菌;
b.檢測TB耐藥基因;
c.提高TB的陽性檢出率。
⑵ 產(chǎn)前診斷
到目前為止,人們對遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法治療,只能通過產(chǎn)前監(jiān)測,減少病嬰出生,以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生,如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生,從孕婦的外周血中分離胎兒DNA,用實時熒光定量PCR儀檢測其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法,易為孕婦所接受。
⑶ 藥物療效考核
對乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV) 定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關(guān)系。HCV高水平表達,干擾素治療作用不敏感,而HCV低滴度,干擾素作用敏感;在拉米夫定治療過程中,HBV-DNA的血清含量曾有下降,隨后若再度上升或超出以前水平,則提示病毒發(fā)生變異。如PCR技術(shù)在HBV檢測中的應(yīng)用及意義:
a.了解乙肝病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量。
b.是否復(fù)制。
c.是否傳染,傳染性有多強。
d.是否有必要服藥。
e.肝功能異常改變是否由病毒引起。
f.判斷病人是適合用哪類抗物。
g.判斷藥物治療的療效。
⑷ 腫瘤基因檢測